JOE phosphoramidite, 6-isomer 是通过连接臂将 6-异构体 4,5-二氯-2,7-二甲氧基荧光素(JOE)与亚磷酰胺活性基团共价结合的功能化荧光试剂,专为多通道高精度荧光检测场景中核酸探针的制备设计,具备标记准确性、光谱优势、合成兼容性及性能稳定性等核心特性。
该试剂的 6-异构体纯度>98%,可有效排除 5-异构体干扰,实现寡核苷酸链 5' 端的专一标记。其发射黄绿色荧光,激发波长 522nm,发射波长 550nm,荧光量子产率约 0.75,摩尔吸光系数达 92000 M⁻¹cm⁻¹,信号亮度较 5-异构体高 5%-8%,且与 FAM(494nm/518nm)、ROX(585nm/605nm)的光谱重叠率<2%,适配多通道高精度荧光检测需求。
亚磷酰胺基团符合常规核酸固相合成标准,与 dA、dC、dG、dT 等核苷亚磷酰胺单体兼容,合成效率>99%/步,无需额外活化即可直接融入自动化核酸合成流程。标记后的核酸探针在杂交特异性及酶促反应(如 PCR 扩增)效率方面不受影响。
产品抗光漂白能力比普通荧光素强 40%,标记后的核酸探针在 4℃避光条件下可稳定储存 6 个月以上,荧光衰减<9%。在 pH 5.0-9.0 范围内,其荧光稳定性优于 5-异构体,能够适配酸性(如溶酶体)、碱性等复杂检测环境。
储存需满足 -20℃避光、无水、密封(充氮气)条件,保质期 12 个月。使用时用无水乙腈溶解配制成 0.1M 储备液,在核酸合成的 5' 端延伸阶段加入,合成后经脱保护、HPLC 或 PAGE 纯化,即可获得 5' 端 6-JOE 标记的核酸,操作符合常规固相合成规范,是多重 qPCR、单细胞多靶点 FISH 等应用的核心材料。