SIMA phosphoramidite, 6-isomer (hydroxyprolinol) 是一种通过羟脯氨醇连接臂将 6-异构体 SIMA 荧光基团与亚磷酰胺活性基团共价偶联的功能化荧光试剂,主要用于核酸探针的 5' 端特异性标记,尤其适用于高稳定性、高杂交效率的核酸探针制备。
该试剂的核心优势在于其独特的 羟脯氨醇连接臂设计,该连接臂具有优异的柔韧性,可显著降低 SIMA 荧光基团与核酸链之间的空间位阻效应,使标记后核酸探针的杂交效率提升 12%-15%;同时,连接臂的高化学稳定性能够增强探针抗核酸酶降解的能力,使探针在生物体内的半衰期延长 2-3 倍。
在标记特异性方面,产品的 6-异构体纯度>98%,有效避免同分异构体干扰,可专一实现寡核苷酸链 5' 端的准确标记,且标记过程不依赖特定碱基序列(无需依赖 T 碱基),适配各类核酸序列,标记后不影响核酸杂交的特异性。
荧光性能与合成兼容性方面,该试剂发射 紫色荧光,激发波长范围为 390-410nm,发射波长范围为 430-450nm,荧光量子产率约为 0.78,与常用荧光染料如 FAM、Cy3 的光谱重叠率<2%,可满足多通道荧光检测需求。其亚磷酰胺基团符合常规核酸合成标准,与核苷单体具有良好兼容性,合成效率>99%/步,可适配自动化核酸合成仪进行规模化制备。
储存与使用方面,试剂需在 -20℃避光、无水、密封(充氮气) 条件下储存,保质期为 12 个月;使用时建议用无水乙腈配制成 0.1M 储备液,在核酸 5' 端延伸阶段加入,合成完成后经脱保护、HPLC 或 PAGE 纯化即可获得标记产物,操作流程符合常规固相合成规范。该试剂是制备高稳定性核酸探针(如活体成像探针、复杂样本检测探针)的关键材料。