FAM phosphoramidite, 6-isomer (hydroxyprolinol)是一种通过在6-异构体荧光素(FAM)与亚磷酰胺活性基团间引入羟脯氨醇连接臂构建的功能化荧光试剂,其核心价值在于为高稳定性核酸探针制备提供关键材料支撑,尤其适用于活体成像探针、长周期检测探针等特殊需求场景。该试剂通过结构优化实现了荧光标记效率与探针生物活性的协同提升,是核酸分子标记领域的重要工具。
羟脯氨醇连接臂赋予分子独特性能,其良好的空间柔韧性可减少荧光基团与核酸链的空间位阻,使标记后核酸探针的杂交效率较普通连接臂提升10%-15%;同时增强荧光基团抗酶解能力,有效延长探针在生物体内的半衰期。6-异构体纯度>98%,可排除5-异构体干扰,确保寡核苷酸链5'端荧光标记的专一性。FAM基团发射黄绿色荧光,激发波长494nm,发射波长518nm,荧光量子产率约0.92,高信号亮度特性满足低丰度靶标检测需求。
亚磷酰胺基团符合常规核酸合成标准,与dA、dC、dG、dT等核苷单体具有良好兼容性,合成效率>99%/步,无需额外活化步骤即可适配自动化核酸合成仪,直接融入标准合成流程。试剂储存需满足-20℃避光、无水、密封(充氮气)条件,保质期12个月;使用时以无水乙腈配制成0.1M储备液,在核酸5'端延伸阶段加入,合成后经脱保护、HPLC/PAGE纯化即可获得5'端标记产物,操作完全符合常规固相合成规范。